tunel(tdt-mediateddutpnickendlabeling)细胞凋亡检测是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核dna的断裂情况,其原理是生物素biotinylate标记的dutp在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(tdtenzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂dna的3’-oh末端,并与连接辣根***化酶(hrp,horse-radishperoxidase)的链霉亲和
1、用二***浸洗2次,每次5min;
2、用梯度***(100、95、90、80、70%)各浸洗1次,每次3min;
3、pbs漂洗2次;
4、用proteinasek工作液处理组织15~30min在21~37℃或者加细胞通透液8min;
5、pbs漂洗2次;
6、制备tunel反应混合液,处理组用50μltdt+450μl荧光素标记的dutp液混匀;而阴性对照组仅加50μl荧光素标记的dutp液,阳性对照组先加入100μldnase
tunel凋亡检测试剂盒的注意事项:
1、标本从取材到固定应在2h以内完成。
2、未打开的试剂盒贮存在-20℃,一旦解冻,就保存在4℃下,避免反复冻融。
3、初次检测细胞凋亡,***设置阳性和阴性对照片。
4、假阳性高是tunel检测的一个主要缺点。观察tunel阳性片是应对照he切片。结合细胞he染色来判断阳性的细胞究竟是假阳性还是真正发生了凋亡。
1、标本从取材到固定应在2h以内完成。
2、未打开的试剂盒贮存在-20℃,一旦解冻,就保存在4℃下,避免反复冻融。
3、初次检测细胞凋亡,***设置阳性和阴性对照片。
4、假阳性高是tunel检测的一个主要缺点。观察tunel阳性片是应对照he切片。结合细胞he染色来判断阳性的细胞究竟是假阳性还是真正发生了凋亡。
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